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布魯氏菌病抗體檢測試劑盒使用說明書
點擊次數(shù):3622 更新時間:2019-11-25

布魯氏菌病抗體檢測試劑盒

使用說明書

【介紹】

布魯氏菌?。?/span>brucellosis,Bru,布?。┛贵w檢測試劑盒用于檢測牛、羊、豬、犬等動物血清中的布魯氏菌抗體。

本試劑盒采用競爭ELISA法,在酶標(biāo)板條微孔上預(yù)包被布魯氏菌抗原。在試驗中,加入稀釋液、待檢血清與酶結(jié)合物,經(jīng)過溫育后,若樣品中含有布魯氏菌特異性抗體,則與酶結(jié)合物中的酶標(biāo)記抗體競爭板孔中包被的抗原表位,溫育后將多余的游離抗體通過洗滌去除;在微孔中加入TMB顯色液,經(jīng)酶催化產(chǎn)生的藍(lán)色信號與樣本中的抗體含量成反比,加入終止液終止反應(yīng)后,用酶標(biāo)儀450nm波長測定反應(yīng)孔中的吸光度A值。

組份

1

抗原預(yù)包被板條

1/2塊

7

終止液

6/11ml

2

酶結(jié)合物

10/20ml

8

陰性對照

200ul

3

10倍濃縮洗滌液

100ml

9

陽性對照

60ul

4

顯色液

11/22ml

10

封板膜

2/4張

5

樣本稀釋液

100ml

11

說明書

1份

6

稀釋板

1/2塊

 

 

 

 

需自備的設(shè)備及試劑

  • 微量移液器:10µl-100µl、100µl-1000µl。
  • 一次性移液器吸頭。
  • 量筒:500ml。
  • 96孔板酶標(biāo)儀。
  • 蒸餾水或去離子水。
  • 洗瓶或洗板機(jī)。

 

【樣品制備】

取動物全血,按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無溶血。

【洗滌液的準(zhǔn)備】

濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫,如有鹽結(jié)晶,搖動使結(jié)晶的鹽溶解,然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。

【注意事項】

  • 試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫,應(yīng)將試劑盒各組份放置室溫至少1小時以上。使用前應(yīng)搖勻,使用后放回2-8℃。
  • 不同品種、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用,使用試劑時應(yīng)防止試劑污染。
  • 顯色液和終止液對皮膚和眼可能有刺激性,使用時應(yīng)該注意防護(hù)。
  • TMB(顯色液)不要暴露于強(qiáng)光和避免接觸氧化劑。
  • 檢測板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中,并盡快置于2-8℃)。
  • 所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染。
  • 嚴(yán)格遵守操作說明可以獲得zui好的結(jié)果。操作過程中移液、定時和洗滌等的全部過程必須。
  • 抗原包被板為一次性用品,不得重復(fù)使用; 

【操作步驟】

  • 在稀釋板上按1:40稀釋待檢血清樣本以及陰陽性對照品(195µl樣本稀釋液+5µl樣本血清),并吹打均勻
  • 取預(yù)包被的檢測板(根據(jù)樣品多少,可拆開分次使用),將稀釋好的待檢血清取20µl加入到檢測板孔內(nèi)。同時設(shè)陰性對照2孔,陽性對照1孔,取陰性及陽性稀釋液各20µl分別加入反應(yīng)孔中。
  • 然后再加酶結(jié)合物80µl/孔,加入反應(yīng)孔中輕微震蕩混勻(勿溢出),蓋上封板膜,置37℃溫育60分鐘。
  • 小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作濃度洗滌液每孔加250ul,后甩去孔內(nèi)液體,以上步驟重復(fù)4-6次,zui后在干凈吸水紙上拍干。
  • 每孔加顯色液100µl,混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色15分鐘。
  • 每孔加終止液50μl,使反應(yīng)終止,10分鐘內(nèi)測定結(jié)果。

【結(jié)果判定】

用酶標(biāo)儀于450nm630nm作參比波長)讀取吸光度OD值。

試驗成立的條件是

 陰性對照(N)OD值>0.5,同時陽性對照(P)阻斷率>80%;

計算方法:

PI (阻斷率)= {1 —(樣品OD值 ÷ 陰性O(shè)D均值)}×100%

陰陽性判斷:

PI(阻斷率)>70%則判斷為陽性;

PI70%則判斷為陰性。

【有限期】

貯存方法: 2 - 8ºC下貯存。

有效期: 12個月。

滬公網(wǎng)安備 31011802001676號

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