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植物RNA提取試劑盒(DNase I)說明書
點擊次數(shù):2206 更新時間:2020-07-06

植物RNA提取試劑盒(DNase I)說明書

RNApure Plant Kit(DNase I)

植物 RNA 提取試劑盒(DNase I)說明書

 

Cat. No.   K0559

保存:DNase I、10×Reaction Buffer:-20  ℃

其它組分:室  溫

 

組分說明

 

                                              Cat No.               K0559

                                              Kit Size                 50

                                              DNase I                1000 U

                                        10×Reaction Buffer           1000  μl

                                             Buffer RL               35 ml

                                            Buffer RLC               35 ml

                                            Buffer RW1               40 ml

                                    Buffer RW2(concentrate)          11 ml

                                        RNase-Free Water             10 ml

                                      Shredder Spin Column             50

                                         Spin Columns RM               50

                                    Collection Tube(1.5 ml)            50

                                     Collection Tube(2 ml)            100

產(chǎn)品簡介

    本試劑盒用于從各種植物中提取純化高品質(zhì)總 RNA,也適用于真菌菌絲 RNA 的提取。*的 Shredder 分離柱,用于

勻質(zhì)化和過濾高粘度的植物或真菌裂解物,同時采用硅基質(zhì)膜吸附 RNA 進(jìn)行純化,使多聚糖等各種污染物通過洗滌被有效

去除,經(jīng)洗脫的RNA可直接用于各種下游實驗。由本試劑盒提取RNA分子量大于 200 堿基,純度高,幾乎無DNA殘留。

如果是對微量 DNA 非常敏感的 RNA 實驗,殘留的 DNA 可利用無 RNase 的 DNase 在柱上進(jìn)行消化去除。提取的 RNA

可用于 Northern Blot、Dot Blot 、RT-PCR 和體外翻譯等實驗。

注意事項

1.  預(yù)防RNase污染,應(yīng)注意以下幾方面:

    1)使用無RNase的塑料制品和槍頭,避免交叉污染。

    2)玻璃器皿應(yīng)在使用前于180℃高溫下干烤4小時,塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10分鐘,用水*沖洗后高壓滅菌。

    3)配制溶液應(yīng)使用無RNase的水。

    4)操作人員戴一次性kou'zhao和手套,實驗過程中要勤換手套。

2.  提取的樣品避免反復(fù)凍融,否則影響 RNA 提取的量和質(zhì)量。

3.  Buffer RL 在使用前請加入β-巰基乙醇,1 ml Buffer RL 加 10 μl β-巰基乙醇。加入β-巰基乙醇的 Buffer RL 室溫可保存 1 個月。Buffer RLC 使用時不需加β-巰基乙醇。

4.  第-次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明先在 Buffer RW2 中加入無水乙醇。

5.  Buffer RL 和 Buffer RLC 如果產(chǎn)生沉淀,請加熱使其溶解后室溫放置。

6.  所有離心步驟均在室溫下進(jìn)行,且所有操作步驟動作要迅速。

自備試劑:β-巰基乙醇、無水乙醇(新開封或提取RNA)  

 

操作步驟

 

 1.   50-100 mg植物組織在液氮中迅速研磨成粉末,加入600 μl Buffer RL(使用前檢查是否加入β-巰基乙醇)或Buffer RLC。渦旋振蕩使其充分裂解。

 注意:1)Buffer RL主要成分為異硫氰酸胍,適用于大多數(shù)植物組織的裂解。但有些植物組織(如玉米的胚乳),由于次級代謝產(chǎn)物較特殊,異硫氰酸胍使樣品產(chǎn)生沉淀,導(dǎo)致RNA提取效果不佳,此時可加入Buffer RLC替代Buffer RL。

 2)56℃孵育1-3分鐘有助于組織的裂解,但是淀粉含量高的植物不要進(jìn)行高溫孵育。

 2.   將步驟1所得全部液體轉(zhuǎn)移至已裝入RNase-Free 2 ml收集管(RNase-Free 2 ml Collection Tube)的Shredder Spin Column中,12,000 rpm(~13,400×g)離心2分鐘,將收集管中的上清液轉(zhuǎn)移到一個新的離心管(自備)中。

注意:1)在吸取液體時可以將槍頭剪掉,便于取樣。

2)Shredder Spin Column可以除去大部分的碎片,但仍會有小部分流出,離心后會在收集管內(nèi)形成沉淀,在進(jìn)行下一步時注意避免吸到沉淀。

 3.   在步驟2所得干凈的裂解液中加入0.5倍體積的無水乙醇,迅速混勻。

注意:加入乙醇后可能會產(chǎn)生沉淀,但不影響后續(xù)試驗。

 4.   將上步得到的溶液轉(zhuǎn)移到吸附柱(Spin Columns RM)中(吸附柱已裝入收集管中),若一次不能將全部溶液加入吸附柱中,請分兩次轉(zhuǎn)入; 10,000 rpm(~8,000 x g)離心15秒,棄掉廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

 5.   向吸附柱中加入350  μl Buffer RW1,10,000 rpm離心1分鐘,棄廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

 6.   配制DNase I  混合液:取52 μl RNase-Free Water,向其中加入8  μl 10×Reaction Buffer 和20  μl DNase I(1U/μl),混勻,  配制成終體積為80 μl的反應(yīng)液。

 7.   向吸附柱中直接加入80 µl DNase I  混合液,20-30℃孵育15分鐘。

 8.   向吸附柱中加入350  μl Buffer RW1, 10,000 rpm離心1分鐘,棄廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

 9.   向吸附柱中加入500  μl Buffer RW2(使用前檢查是否加入無水乙醇), 10,000 rpm離心15秒,棄廢液。

 10. 重復(fù)步驟9。

 11. 將吸附柱放回收集管中,12,000 rpm離心1分鐘,將吸附柱置于室溫數(shù)分鐘,以*晾干。

     注意:這一步的目的是將吸附柱中殘余乙醇去除,乙醇?xì)埩魰绊懞罄m(xù)的酶促反應(yīng)(酶切、PCR等)。

 12. 將吸附柱裝入新的RNase-Free 1.5 ml  收集管中,向吸附膜的中間加入30-50 μl RNase-Free Water,室溫放置1分鐘,10,000 rpm離心1分鐘,得到的RNA溶液保存在-70℃,防止降解。

 注意:1)  RNase-Free Water 體積不應(yīng)小于 30 μl,體積過小影響回收率。

 

2)  如果要提高RNA的產(chǎn)量,可用30-50 μl新的RNase-Free Water重復(fù)步驟12。

 

3)  如果要提高RNA濃度,可將得到的溶液重新加入到吸附柱中,重復(fù)步驟12。

 

 

實驗代做服務(wù):

 

免疫組化IHC染色實驗服務(wù)

細(xì)胞、組織TUNEL凋亡染色實驗服務(wù)

試劑盒免費代檢測

實驗室代做實驗項目

 

透射電鏡服務(wù)實驗服務(wù)

石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

核仁組成區(qū)嗜銀-AGNOR染色實驗服務(wù)

免疫共沉淀(CHIRP)實驗

RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP)實驗代做

酶聯(lián)免疫(ELISA)技術(shù)服務(wù)

雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒

喹諾酮類快速檢測試劑盒

組織芯片/微陣列定制技術(shù)服務(wù)

 

染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實驗服務(wù)

 

多因子液相芯片技術(shù)(Luminex)實驗

免疫細(xì)胞化學(xué)ICC實驗服務(wù)

ATP/ADP檢測實驗服務(wù)

蛋白雙向(2-D)電泳實驗服務(wù)

蛋白相互作用分析

堿性磷酸酶染色實驗服務(wù)

PKC活性檢測實驗

非標(biāo)定量實驗

(Label-free)

 

DIGE技術(shù)實驗服務(wù)

端粒酶活性檢測實驗

細(xì)胞生長曲線的測定

掃描電鏡服務(wù)

NF-KB p65活性檢測實驗

 

 

滬公網(wǎng)安備 31011802001676號

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