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Tricine-SDS-PAGE凝膠制備試劑盒說明書
點擊次數(shù):1961 更新時間:2020-08-24

 

Tricine-SDS-PAGE凝膠制備試劑盒說明書

 

Tricine-SDS-PAGE Gel Kit

Tricine-SDS-PAGE凝膠制備試劑盒

 

目錄號:K2384

 

 

組分說明及保存條件

 

           Cat. No.          K2384

                                            保存條件

           Size             約 50塊膠

         49.5%T 3%C         30 ml               2-8ºC

         49.5%T 6%C         100 ml               2-8ºC

         凝膠緩沖液           140 ml               2-8ºC

         甘油                30 ml               室溫

         APS                0.5 g                室溫

         TEMED               750 ul           室溫,避光

 

本產(chǎn)品所提供的 APS(過硫酸銨)為固體粉末,使用前加入雙蒸水溶解即配制成10%APS溶液(0.5 g  APS加5 ml雙蒸水),將溶液分裝后置于-20℃保存,通常半年內(nèi)有效。溶液在使用中可放置4℃保存兩周。

 

本產(chǎn)品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及其他用途  

 

 

產(chǎn)品簡介

 

  常規(guī)的Tris-SDS-PAGE電泳的只能分辨大分子蛋白,對于相對分子量小的,尤其

是10 kD以下的蛋白分辨率極低。而Tricine-SDS-PAGE可以很好的分離分子量在1-10 kD

的蛋白及多肽,成為目前電泳法變性分離多肽的主要方法。本產(chǎn)品包括Tricine-SDS-

PAGE凝膠制備所需全套試劑,只需自備蒸餾水,即可制備高質(zhì)量各種濃度的凝膠,方

便、快捷,電泳后可直接用于考染、銀染、Western雜交等實驗。

 

注意事項

 

1.  10%APS配制后分裝-20度保存。APS溶液不穩(wěn)定,應(yīng)盡量減少室溫存放時間,每

次取用后立即放回冰箱,以防失效;若發(fā)現(xiàn)凝膠聚合時間延長,應(yīng)考慮更換,使用

-20度保存的10%APS。

2.在凝膠配制過程中,尤其是液體混勻步驟,應(yīng)盡量避免氣泡的產(chǎn)生。

3.在分離膠上層加蒸餾水時要小心操作,加水時速度不能太快。

4.丙烯酰胺具有神經(jīng)毒性,操作時請穿著實驗服并佩戴一次性手套。

5.本產(chǎn)品僅用于科研,不能用于人體實驗或人體治療。

 

操作步驟

 

根據(jù)目的蛋白分子量大小選擇合適的PAGE分離膠配制濃度,凝膠濃度配方參考附表。

 I 配制分離膠

1.將不同體積的雙蒸水、49.5%T 6%C、凝膠緩沖液和甘油加入到離心管中混合。

2.加入10%APS和TEMED,立即渦旋混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。

3.在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液(1 mm mini-gel,分離膠溶液加約4 ml),

   然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-3  cm的水層,使凝膠表面保持平整。

4.靜置,待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個清晰的界面表示凝膠已聚合。

 

 II 配制夾層膠

  去除覆蓋在分離膠上的水層,用濾紙將殘留的水盡量吸去。

1.將不同體積的雙蒸水、49.5%T 3%C和凝膠緩沖液加入到離心管中混合。

2.加入10%過硫酸銨和TEMED,立即渦旋混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。

3.將適量的夾層膠溶液迅速加至分離膠的上面(對于1 mm的mini-gel,夾層膠溶液加

   約1 ml ),然后在夾層膠溶液上輕輕覆蓋一層水層,使凝膠表面保持平整。

4.靜置,待夾層膠和水層之間出現(xiàn)一個清晰的界面表示凝膠已聚合。

 

III 配制濃縮膠

去除覆蓋在夾層膠上的水層,用濾紙將殘留的水吸去。

    1.將不同體積的雙蒸水、49.5%T 3%C和凝膠緩沖液加入到離心管中混合。

    2.加入10%過硫酸銨和TEMED,立即渦旋混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。

    3.將梳子插入凝膠內(nèi),避免產(chǎn)生氣泡。

    4.待凝膠聚合后,小心地拔出梳子,以免破壞加樣孔。

    5.進(jìn)行電泳操作。

 

IV 電泳

將電泳槽放入4℃或冰水浴中,外槽加入陽極緩沖液(K2388),內(nèi)槽加入陰極緩沖液(K2387),30V預(yù)電泳10 min,將樣品(已經(jīng)過Tricine上樣緩沖液YJ2385處理)加入點樣孔后30V電泳1小時,100V電泳至溴酚藍(lán)到達(dá)膠底部后停止電泳,進(jìn)行后續(xù)的考馬斯亮藍(lán)染色或電轉(zhuǎn)。

 

 

實驗代做服務(wù):

 

免疫組化IHC染色實驗服務(wù)

細(xì)胞、組織TUNEL凋亡染色實驗服務(wù)

試劑盒免費代檢測

實驗室代做實驗項目

 

透射電鏡服務(wù)實驗服務(wù)

石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

核仁組成區(qū)嗜銀-AGNOR染色實驗服務(wù)

免疫共沉淀(CHIRP)實驗

RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP)實驗代做

酶聯(lián)免疫(ELISA)技術(shù)服務(wù)

雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒

喹諾酮類快速檢測試劑盒

組織芯片/微陣列定制技術(shù)服務(wù)

 

染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實驗服務(wù)

 

多因子液相芯片技術(shù)(Luminex)實驗

免疫細(xì)胞化學(xué)ICC實驗服務(wù)

ATP/ADP檢測實驗服務(wù)

蛋白雙向(2-D)電泳實驗服務(wù)

蛋白相互作用分析

堿性磷酸酶染色實驗服務(wù)

PKC活性檢測實驗

非標(biāo)定量實驗

(Label-free)

 

DIGE技術(shù)實驗服務(wù)

端粒酶活性檢測實驗

細(xì)胞生長曲線的測定

掃描電鏡服務(wù)

NF-KB p65活性檢測實驗

 

慢病毒包裝實驗服務(wù)

滬公網(wǎng)安備 31011802001676號

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