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四環(huán)素快速檢測(cè)試劑盒說明書
點(diǎn)擊次數(shù):1610 更新時(shí)間:2020-12-09

 

四環(huán)素快速檢測(cè)試劑盒說明書

 

一、原理

 

本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng) ELISA 方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物四環(huán)素將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗四環(huán)素抗體,加入酶標(biāo)記物后,用 TMB 底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物四環(huán)素的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物四環(huán)素的含量。

 

二、試劑盒特性

 

  • 試劑盒靈敏度: 0.05ppb

 

u

孵育溫度:

25

u

孵育時(shí)間:

30min15min

 

樣本檢測(cè)下限

 

 

雞肉樣本:

 

四環(huán)素 ···········································

0.4ppb

甲按胺四環(huán)素 ··································

0.4ppb

吡四環(huán)素 ········································

0.4ppb

金霉素  ········································

0.4ppb

脫甲基金霉素 ·································

1.2ppb

土霉素 ··········································

0.8ppb

強(qiáng)力霉素 ·······································

1ppb

豬肉、蜂蜜樣本:

 

四環(huán)素 ··········································

0.5ppb

甲按胺四環(huán)素 ·································

0.5ppb

吡四環(huán)素 ······································

0.5ppb

金霉素 ·········································

0.5ppb

脫甲基金霉素 ································

1.5ppb

土霉素 ···········································

1ppb

強(qiáng)力霉素 ········································

1.2ppb

 

  • 交叉反應(yīng)率

 

四環(huán)素 ··········································  100%

 

甲按胺四環(huán)素 ·································  125%

 

吡四環(huán)素 ·······································

110%

金霉素 ···········································

100%

脫甲基金霉素 ···································

35%

土霉素 ············································

58%

強(qiáng)力霉素 ·········································

45%

 

  • 樣本回收率

 

雞肉、豬肉、蜂蜜 ····························  85±20%

 

三、試劑盒組成

 

1

微量測(cè)試孔

每條 8 孔,一板 12 條

 

 

 

 

2

標(biāo)準(zhǔn)品濃縮液

1ml

黑色帽

81ppb

 

 

 

 

3

高濃度標(biāo)準(zhǔn)品

1ml

黑色帽

100ppb

 

 

 

 

4

酶標(biāo)記物

7ml

白色帽

 

 

 

 

5

抗體工作液

7ml

白色帽

 

 

 

 

6

底物 A 液

7ml

白色帽

 

 

 

 

7

底物 B 液

7ml

黑色帽

 

 

 

 

8

終止液

7ml

黃色帽

 

 

 

 

9

20X 濃縮洗滌液

15ml

白色帽

 

 

 

 

10

10X 樣本提取液

50ml*2

透明帽

 

 

 

 

11

標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶液

15ml*2

藍(lán)色帽

 

 

 

 

 

四、所用儀器、試劑

 

具備的儀器:酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量 0.01g)、恒溫箱

 

微量移液器:?jiǎn)蔚?20200µl、單道 1001000µl、多道 30300 µl

 

劑:甲醇

 

五、樣本前處理步驟

 

樣本處理前須知

 

a)實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時(shí)要更換吸頭。

 

b)實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈, 

必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔,以避免污染干擾實(shí)

3、 在 ELISA 分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于

驗(yàn)結(jié)果。

洗板的一致性,正確的洗板操作是 ELISA 測(cè)定

u

樣本前處理需配制:

程序中的要點(diǎn)。

 

配液 1

樣本提取液 A

4、 所有恒溫孵育過程,避免光線照射,用蓋板膜

 

 

用去離子水450ml 與50ml 10X 樣本提取液

蓋住微孔板。

 

 

 

混勻或按 91 的比例按需配制( 10X

u  操作步驟:

 

 

 

樣本提取液有結(jié)晶,需溶解后在進(jìn)行稀

1、從 28℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫(20

 

 

)。

25℃)平衡 30min 以上,注意每種液體試劑使

配液 2

樣本提取液 B

用前均須搖勻。

 

 

 

取甲醇 50ml 與 450ml 樣本提取液 A 混勻

2、配制標(biāo)準(zhǔn)品

 

 

 

或按 19 的比例按需配制。

標(biāo)準(zhǔn)品 650µl 標(biāo)準(zhǔn)品濃縮液(81ppb)用 950µl

配液 3

樣本提取液 C

標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶液稀釋

4.05ppb

 

 

取甲醇 100ml 與 270ml 樣本提取液 A 混勻

標(biāo)準(zhǔn)品 5600µl 標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶液與 300µl 標(biāo)準(zhǔn)品 6

 

 

或按 1027 的比例按需配制。

混合

1.35ppb

u

樣本處理:

標(biāo)準(zhǔn)品 4600µl 標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶液與 300µl 標(biāo)準(zhǔn)品 5

a)雞肉處理方法

混合

0.45ppb

1、稱取 1±0.05g 均質(zhì)后的樣本于 50ml 離心管中,

標(biāo)準(zhǔn)品 3600µl 標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶液與 300µl 標(biāo)準(zhǔn)品 4

 

加入 8ml 樣本提取液 A(見配液 1,振蕩 3min,

混合

0.15ppb

 

室溫 4000r/min 以上,離心 10min;

標(biāo)準(zhǔn)品 2600µl 標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶液與 300µl 標(biāo)準(zhǔn)品 3

2、取 50 上清液用于分析

混合

0.05ppb

 

樣本稀釋倍數(shù): 8 倍

標(biāo)準(zhǔn)品 1:標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶液

0ppb

b)豬肉處理方法

3、取出框架及需要數(shù)量的微孔,將不用的微孔放

1、稱取 1±0.05g 均質(zhì)后的樣本于 50ml 離心管中,

入自封袋,保存于 2-8℃。

 

 

加入 10ml 樣本提取液 B(見配液 2,振蕩 3min,

4、配液:將 15ml 濃縮洗滌液(20 倍濃縮)用去

 

室溫 4000r/min 以上,離心 10min;

離子水按照 119 稀釋(1 份濃縮洗滌液+19 份

2、取 50 µl 上清液用于分析

去離子水),或按所需用量配制洗滌液。

 

樣本稀釋倍數(shù): 10 倍

5、編號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每

c)蜂蜜處理方法

個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做 2 孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和

1、 稱取 1±0.05g 均質(zhì)后的樣本于 50ml 離心管中,

樣本孔所在的位置。

 

 

加入10ml 樣本提取液C(見配液3,振蕩3min,

6、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本 50µl/孔到各自的微孔中,然后加

 

室溫 4000r/min 以上,離心 10min;

加入酶標(biāo)記物 50µl/孔再加入抗體工作液 50µl/

2、 取 50 µl 上清液用于分析

孔,用蓋板膜封板,輕輕振蕩混勻。25℃環(huán)境

 

樣本稀釋倍數(shù): 10 倍

中反應(yīng) 30min

 

 

7、將孔內(nèi)液體甩干,用已稀釋的洗滌液 250µl/

六、酶標(biāo)免疫分析程序:

洗板 45 次,每次間隔 1530 秒,用吸水紙

u

測(cè)定前應(yīng)須知:

 

 

 

1、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫

拍干(拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺

 

 

 

 

 

2025℃)。

破)。

 

 

8、顯色:加入底物 A  50µl/孔,再加入底物 B

 

 

2、 使用之后立即將所有試劑放回 28℃。

 

 

50µl/孔,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境中避光顯

 

 

 

 

 

 

 

15min

 

9、測(cè)定:加入終止液 50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標(biāo)儀于 450nm 處(建議用雙波長(zhǎng) 450/630n m 檢測(cè),5min 內(nèi)讀數(shù)),測(cè)定每孔 OD 值。

 

七、結(jié)果判定

 

結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第 1 種方法,定量判定用第 2 種方法。注意樣本吸光度值與其所含四環(huán)素量成負(fù)相關(guān)。

 

1、粗略判定:

 

用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本 1 的吸光度值為 0.3,樣本 2 的吸光度值為 1.0,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:

 

0ppb  2.243;0.05ppb  1.816;0.15ppb  1.415; 0.45ppb  0.741.35ppb  0.313;4.05ppb  0.155

 

則樣本 1 的濃度范圍是 1.35ppb4.05ppb;樣本 2

 

的濃度范圍是 0.15ppb0.45ppb,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中四環(huán)素實(shí)際濃度。

2、定量分析

 

1)百分吸光率的計(jì)算,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以第--個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0 標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘以 100%,即

 

B

百分吸光率(%)= ×100%

B0

 

B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值 B0—0ng/ml 標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

 

2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)

 

品濃度(ng/ml)的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中四環(huán)素實(shí)際濃度。

 

若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。

 

八、 注意事項(xiàng)

 

1、室溫低于 25℃或試劑及標(biāo)本未回到室溫(2025℃)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的 OD 值偏低。

2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì)伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

3、混合要均勻,否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。

4、反應(yīng)終止液為 2M 硫酸,避免接觸皮膚。

5、不要使用過了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會(huì)引起靈敏度、OD 值變化;不要交換使用不同批號(hào)的盒中試劑。

6、不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封;標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對(duì)光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。7、顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。標(biāo)準(zhǔn)品 1 的吸光度值小于 0.5 時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。

8、該試劑盒理想反應(yīng)溫度為 25℃,溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

 

九、儲(chǔ)藏條件和保質(zhì)期

 

1、儲(chǔ)藏條件:試劑盒于 2-8℃保存,不要冷凍。

2、保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為 1 年,生產(chǎn)日期見包裝盒。

 

提示:酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,酶標(biāo)板仍然正常有效,不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,請(qǐng)放心使用。

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