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GENMED血液維生素A高效液相色譜法定量檢測注意事項
點擊次數(shù):2610 更新時間:2021-02-23

 

GENMED血液維生素A高效液相色譜法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)

 

主要用途

 

GENMED血液維生素A高效液相色譜法定量檢測試劑是一種旨在通過抗氧化處理和有機溶劑萃取,進而在高效液相色譜儀和紫外光譜下(325nm波長)檢測分析,分離出維生素A視黃醇波峰,以定量測定樣品維生素A含量權(quán)*#威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的其適用于人體、動物等血液(血漿、血清)樣品中維生素A及其衍生物,例如視黃醇(retinol)、視黃醛retinaldehyde)、視黃酸(retinoic acid、3-脫氫視黃醇(3-dehydroretinol;vitamin A2維生素 A 棕櫚酸酯retinol palmitate維生素A乙酸酯retinol acetate檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定。

 

技術(shù)背景

 

視黃酸類(retinoid生素AVitamin A及其相關(guān)衍生物的統(tǒng)稱,其中包括視黃醇(retinol)、視黃醛retinaldehyde)、視黃酸(retinoic acid)等。維生素A的結(jié)構(gòu)形式包括視黃醇(vitamin A1)及其酯類、3-脫氫視黃醇(3-dehydroretinolvitamin A2)及其酯類,視黃醛、視黃酸、新維生素Aneovitamin A等。維生素A在肝臟脂肪組織里以酯類形式儲存,維生素 A 棕櫚酸酯retinol palmitate維生素A乙酸酯retinol acetate),占5%,而95%以水解形式,在體內(nèi)循環(huán)。維生素A在維護動物和人體眼睛、呼吸和生殖系統(tǒng)的上皮組織,以及骨發(fā)育的正常功能方面起著主要作用。維生素A缺陷將導(dǎo)致眼球干燥癥xerophthalmia)、皮膚異常、易發(fā)感染;維生A中毒會出現(xiàn)困倦(drowsiness)、顱壓(cranial pressure)增加、血鈣過高(hypercalcemia)、脫發(fā)、高胡蘿卜素血癥(hypercarotenemia)等。通過抗氧化處理和有機溶劑萃取,進而在高效液相色譜儀和紫外光譜下(325nm波長)檢測分析,分離出維生素A,即視黃醇波峰,以定量分析維生素A的含量。

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

GENMED緩沖液(Reagent A       10毫升

GENMED萃取液AReagent B  20毫升

GENMED萃取液BReagent C       40毫升

GENMED去干擾液(Reagent D       20毫升

GENMED溶解液(Reagent E        5毫升

GENMED流相液(Reagent F      500毫升

GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G      500微升

產(chǎn)品說明書      1

 

保存方式

 

保存GENMED緩沖液(Reagent A)、GENMED萃取液AReagent B)和GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G)在-20冰箱里,其余的保存在4冰箱里,GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G避免光照;試劑具有揮發(fā)性,注意密閉瓶蓋;GENMED萃取液BReagent C)、GENMED去干擾液(Reagent D)和GENMED流相液(Reagent F)具有腐蝕性,注意操作安全;有效保證3月

 

用戶自備

 

1.5毫升離心管:用于樣品處理和標(biāo)準(zhǔn)液配制的容器

2毫升離心管:用于樣品操作的容器

15毫升錐形離心管:用于樣品操作的容器

(微型)臺式離心機:用于樣品處理

干式培養(yǎng)箱或離心濃縮儀:用于樣品干化

高效液相色譜儀(HPLC):用于定量測定

 

實驗步驟

 

  • 樣品準(zhǔn)備 

 

  • 血漿樣品準(zhǔn)備

 

  • 準(zhǔn)備好EDTA抗凝管
  • 抽取1毫升血液,置于抗凝管里
  • 放進4℃微型臺式離心機離心10分鐘,速度為700g3000RPM,例如eppendorf 5415
  • 小心移取上層黃色液體到新的1.5毫升離心管――此為血漿成分(注意:避免觸碰白色液體層
  • (選擇步驟)即刻置于冰槽里備用或放進-70℃冰箱里保存
  • 移取500微升血漿到15毫升錐形離心管
  • 加入500微升GENMED緩沖液(Reagent A,混勻
  • 加入1毫升GENMED萃取液AReagent B
  • 渦旋震蕩20
  • 加入2毫升GENMED萃取液BReagent C
  • 渦旋震蕩1分鐘
  • 放進臺式離心機離心5分鐘,速度為1000g 
  • 移取2毫升上層液相到2毫升離心管
  • 放進40干式培養(yǎng)箱晾干或離心濃縮儀揮干
  • 加入100微升GENMED溶解液(Reagent E,混勻,避免光照
  • 即刻進行后續(xù)高效液相色譜分析

 

  • 血清樣品準(zhǔn)備

 

  • 準(zhǔn)備好不含抗凝劑的儲存管 
  • 抽取1毫升血液,置于儲存管里
  • 室溫下,靜置30分鐘,直至血液凝結(jié)
  • 放進4℃微型臺式離心機離心15分鐘,速度為2000g5000RPM,例如eppendorf 5415
  • 小心移取上層黃色液體到新的1.5毫升離心管――此為血清成分(注意:避免觸碰白色液體層
  • (選擇步驟)即刻置于冰槽里備用或放進-70℃冰箱里保存
  • 移取200微升血清到新的2毫升離心管
  • 加入200微升GENMED緩沖液(Reagent A,混勻
  • 加入400微升GENMED萃取液AReagent B
  • 渦旋震蕩20
  • 加入800微升GENMED去干擾液(Reagent D
  • 渦旋震蕩1分鐘
  • 放進臺式離心機離心5分鐘,速度為8500g
  • 移取800微升下層液相到2毫升離心管
  • 放進40干式培養(yǎng)箱晾干或離心濃縮儀揮干
  • 加入100微升GENMED溶解液(Reagent E,混勻,避免光照
  • 即刻進行后續(xù)高效液相色譜分析

 

  • 測定準(zhǔn)備

 

  • 開啟儀器預(yù)熱15分鐘
  • 根據(jù)下表設(shè)置高效液相色譜儀(HPLC)參數(shù)

 

參數(shù)

推薦

補充說明

色譜柱

長度:15cm

直徑:3.9mm

Waters儀器或

Agilent儀器

固定相

ODS

 

流動相

GENMED流相液(Reagent F

流速

2毫升/分鐘

 

注射容量

100微升

10微升至100微升

檢測

紫外

 

波長

325nm

 

柱溫

30

 

峰值時間(retention

7分鐘

視黃醇(retinol

運行時間

20分鐘

參考

 

  • 使用GENMED流相液(Reagent F運行1次(30毫升),以達到色譜柱均衡和溫度穩(wěn)定

 

  • 標(biāo)準(zhǔn)樣品配制

 

  • 準(zhǔn)備好51.5毫升離心管,標(biāo)記為15號管
  • 分別加入100微升GENMED溶解液(Reagent E15號管
  • 移取100微升GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G1號管,混勻
  • 小心移取100微升1號管稀釋的GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G2號管,混勻
  • 小心移取100微升2號管稀釋的GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G3號管,混勻
  • 小心移取100微升3號管稀釋的GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G4號管,混勻
  • 15號管放進冰槽里備用,避免光照;標(biāo)準(zhǔn)管濃度見下表

管號

GENMED溶解液(Reagent E

GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G

標(biāo)準(zhǔn)視黃醇濃度

1

100微升

100微升

20微克/毫升

2

100微升

100微升1號管

10微克/毫升

3

100微升

100微升2號管

5微克/毫升

4

100微升

100微升3號管

2.5微克/毫升

5

100微升

0

0

 

四、色譜分析

 

  • 將上述配制的GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G和待測樣品放進30培養(yǎng)箱預(yù)熱
  • 每次(每個樣品)注射100微升
  • 每次(每個樣品)運行1020分鐘
  • 獲得色譜波峰圖:波峰面積(peak area)或峰值,保存記錄
  • 全部運行完成,使用適量的GENMED流相液(Reagent F清洗色譜柱

 

五、計算含量

 

  • 方法一:通過儀器中的軟件進行測算
  • 方法二:構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線:縱座標(biāo)(Y軸)為波峰面積(peak area;橫座標(biāo)(X軸)為標(biāo)準(zhǔn)視黃醇濃度(微克/毫升),根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對應(yīng)視黃醇濃度(微克/毫升)
  • 方法三:公式計算(選擇單一濃度的標(biāo)準(zhǔn)液)

 

樣本視黃醇濃度(微克/毫升)=【樣本波峰面積(peak areaX標(biāo)準(zhǔn)視黃醇濃度÷對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)視黃醇濃度的波峰面積

 

 注意事項

 

  • 本產(chǎn)品為20次操作 
  • 本產(chǎn)品可以用于視黃醇(retinol)、視黃醛retinaldehyde)、視黃酸(retinoic acid、3-脫氫視黃醇(3-dehydroretinol;vitamin A2、維生素 A 棕櫚酸酯retinol palmitate維生素A乙酸酯retinol acetate)等的檢測
  • 本產(chǎn)品檢測范圍是0.350毫克/
  • 操作時,須戴手套
  • 試劑具有揮發(fā)性,注意密閉瓶蓋或使用封口膜
  • 樣品避免光照
  • 樣品建議新鮮采集,避免溶血
  • GENMED萃取液BReagent C)、GENMED去干擾液(Reagent DGENMED流相液(Reagent F具有腐蝕性,注意操作安全
  • 色譜柱的異物殘留、氣泡產(chǎn)生、溫度未達均衡等將導(dǎo)致異常波峰、時間偏移等
  • 用戶可以使用已知濃度的GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G作為內(nèi)參標(biāo)準(zhǔn)加入到樣品中,檢測回收率(recovery
  • 維生素AHPLC參考圖譜如下

 

 

 

  • 維生素A及其衍生物的出峰時間(retention)以用戶操作時,使用的GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G實際出峰為準(zhǔn)
  • 本公司提供系列維生素檢測試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 

  • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
  • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感

 

使用承諾

 

秉著信譽至上、客戶滿意、質(zhì)量承諾的宗旨為我們的用戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)。用戶收到貨后,應(yīng)按照產(chǎn)品說明書上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷售前已作嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定,保證說明書所述的使用效果。在貨到后10天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問題,請立即以書面形式(實驗報告)與本公司聯(lián)系,并將該產(chǎn)品退回,經(jīng)檢驗確系產(chǎn)品質(zhì)量所致,本公司負(fù)責(zé)更換產(chǎn)品。如系使用者錯誤操作所致,本公司不承擔(dān)由此造成的損失。

 

友情提醒

 

IF IT DOESN’T WORK RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

訂購信息

 

單組份訂購信息

 

編號 名稱 規(guī)格

GMS19066.2.2 GENMED血液維生素A高效液相色譜法定量檢測試劑盒 20

GMS19066.2.2A GENMED緩沖液(Reagent A     100毫升

GMS19066.2.2B GENMED萃取AReagent B 100毫升

GMS19066.2.2C GENMED萃取BReagent C      100毫升

GMS19066.2.2D GENMED去干擾液(Reagent D 100毫升

GMS19066.2.2E GENMED溶解液(Reagent E 50毫升

GMS19066.2.2F  GENMED流相液(Reagent F 500毫升

GMS19066.2.2G  GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G      1毫升

 

試劑盒訂購信息

 

產(chǎn)品編號

名稱

規(guī)格

GMS19066.2.1

通用型維生素A高效液相色譜法定量檢測試劑盒

20

GMS19066.2.2

血液維生素A高效液相色譜法定量檢測試劑盒

20

GMS19066.2.3

組織維生素A高效液相色譜法定量檢測試劑盒

20

GMS19066.2.4

食物維生素A高效液相色譜法定量檢測試劑盒

20

GMS19066.2.5

牛奶維生素A高效液相色譜法定量檢測試劑盒

20

GMS19066.2.6

魚肝油維生素A高效液相色譜法定量檢測試劑盒

20

 

實驗代做服務(wù):

 

免疫組化IHC染色實驗服務(wù)

細胞、組織TUNEL凋亡染色實驗服務(wù)

試劑盒免費代檢測

實驗室代做實驗項目

 

透射電鏡服務(wù)實驗服務(wù)

石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

核仁組成區(qū)嗜銀-AGNOR染色實驗服務(wù)

免疫共沉淀(CHIRP)實驗

RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP)實驗代做

酶聯(lián)免疫(ELISA)技術(shù)服務(wù)

雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒

喹諾酮類快速檢測試劑盒

組織芯片/微陣列定制技術(shù)服務(wù)

 

染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實驗服務(wù)

 

多因子液相芯片技術(shù)(Luminex)實驗

免疫細胞化學(xué)ICC實驗服務(wù)

ATP/ADP檢測實驗服務(wù)

蛋白雙向(2-D)電泳實驗服務(wù)

蛋白相互作用分析

堿性磷酸酶染色實驗服務(wù)

PKC活性檢測實驗

非標(biāo)定量實驗

(Label-free)

 

DIGE技術(shù)實驗服務(wù)

端粒酶活性檢測實驗

細胞生長曲線的測定

掃描電鏡服務(wù)

NF-KB p65活性檢測實驗

 

慢病毒包裝實驗服務(wù)

 

滬公網(wǎng)安備 31011802001676號

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