加A試劑盒說(shuō)明書
A-Tailing Kit
加A試劑盒
目錄號(hào)：YJ0803
保存條件：-20℃保存。
組分說(shuō)明
Cat. No. YJ0803
Size 20次
A-Tailing Enzyme（5 U/μl） 25 μl
10×A-Tailing Buffer 120 μl
dATP，2 mM 25 μl
本產(chǎn)品僅供科研使用，請(qǐng)勿用于臨床診斷及其他用途
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
利用具有3’-5’外切酶活性的高保真DNA聚合酶，如Pfu等進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，其PCR產(chǎn)物為不帶 A尾的平末端 DNA片段，如想將該片段克隆到 T載體上，需要先利用A-Tailing Enzyme在平末端片段后加上A尾后才能與T載體上3’末端的T堿基互補(bǔ)連接。
本產(chǎn)品是在平末端 DNA片段的3’末端添加一個(gè)A尾，使平末端的 DNA片段進(jìn)行TA克隆
成為可能。本試劑盒提供了加A尾需要的所有成分，可以在30分鐘完成整個(gè)過(guò)程。與平
末端DNA片段克隆相比，TA克隆具有較高的克隆效率，可大大提高實(shí)驗(yàn)成功率。
使用方法
1．將平末端PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化，若 PCR無(wú)非特異擴(kuò)增可用 DNA產(chǎn)物回收試劑盒進(jìn)行純化，若 PCR產(chǎn)物有非特異性擴(kuò)增可用膠回收純化試劑盒進(jìn)行純化。
2．將以上純化好的平末端DNA片段按以下反應(yīng)體系加A尾：
試劑 10 μl體系
平末端 DNA片段 X μl（<1 μg）
dATP 1 μl
10×A-Tailing Buffer 1 μl
A-Tailing Enzyme 1 μl
RNase-Free Water 補(bǔ)足至 10 μl
3．輕輕混勻后72℃孵育30 min。
注意：加A尾的產(chǎn)物可以不需要再次純化，可直接用于連接反應(yīng)。
