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*0感受態(tài)細(xì)胞說明書
點擊次數(shù):2764 更新時間:2015-05-18

 


                                            *0感受態(tài)細(xì)胞說明書                   


*0 Competent Cell
*0感受態(tài)細(xì)胞
目錄號:YJ0807

保存條件:-80℃保存。

組分說明

                   Cat. No.                         YJ0807B
                   Size                             10×100 μl
                   *0 Competent Cell             10×100 μl
                   Control DNA pUC19,0.1 ng/μl         10 μl

產(chǎn)品簡介

  本產(chǎn)品是大腸桿菌*0菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞,可用于  DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。*0是一種常用于質(zhì)??寺〉木?,其φ80lacZΔM15基因產(chǎn)物可與載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現(xiàn)α互補(bǔ),可用于藍(lán)白斑篩選。使用pUC19質(zhì)粒檢測,轉(zhuǎn)化效率可達(dá)10 8  ,適用于的質(zhì)粒DNA克隆并能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定復(fù)制。

本產(chǎn)品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及其他用途 


    注意事項

    1.感受態(tài)細(xì)胞一定要用干冰運輸。感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)在  -80℃下保存,不可反復(fù)凍融和放置時間過長,以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
    2.轉(zhuǎn)化所有步驟均在無菌條件下操作。
    3.包裝中有0.1 ng/μl的pUC19DNA,供對照試驗使用。

    操作步驟

    1.取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl,可以根據(jù)實際情況分裝使用。
       以下實驗以50 μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
    2.待感受態(tài)細(xì)胞融化后,向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA(根據(jù)實際情況加入適量的DNA,通常100 μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴30分鐘。
    3.42℃熱擊45秒,迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中,冰上靜置2-3分鐘。
    4.每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床,150 rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇。
    5.根據(jù)實驗需求,取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞,加到含相應(yīng)抗生素的   SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開,將平板置于37℃直至液體被吸收,倒置培養(yǎng),37℃培養(yǎng)12-16小時。

       注意:1)涂布用量可根據(jù)具體實驗調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多,可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板;若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少,可取200-300 μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計的克隆數(shù)較少,可通過離心(4,000rpm,2分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于平板中。

2)新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干,可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。
       3)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少,可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。


     

 

滬公網(wǎng)安備 31011802001676號

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