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人單個(gè)核細(xì)胞分離液(FICOLL配制)
點(diǎn)擊次數(shù):3206 更新時(shí)間:2016-01-05

人單個(gè)核細(xì)胞分離液(FICOLL配制) LDS1075

 

人全血單個(gè)核細(xì)胞分離液(FICOLL配置)說(shuō)明書(shū)

【包裝規(guī)格】
200ml/
【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】
A.適用儀器
zui大離心力可達(dá)1200g的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
B.耗材

 

 

產(chǎn)品名稱(chēng)

產(chǎn)品貨號(hào)

產(chǎn)地

15ml離心管散裝

339650

美國(guó)  NUNC

15ml離心管架裝

339651

美國(guó)  NUNC

50ml離心管散裝

339652

美國(guó)  NUNC

50ml離心管架裝

339653

美國(guó)  NUNC

無(wú)菌膠頭滴管或塑料滴管

 

 

【檢驗(yàn)方法】
全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在20±2的條件下進(jìn)行。
首先根據(jù)樣本量大小,分以下幾種情況:
一、使用15ml離心管時(shí):
情況A:血液樣本量小于 3ml時(shí),實(shí)驗(yàn)方法如下:
1.取一支15ml離心管,加入3ml分離液。
2.用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上,400-650g,離心20-30min(注:根據(jù)血
液樣本量確定離心條件,血液樣本量越多,離心力越大,離心時(shí)間越長(zhǎng),具體離心條件
需客戶(hù)自行摸索,以達(dá)到分離效果)。
3.離心后,此時(shí)離心管中由上至下分為四層。*層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色單個(gè)
核細(xì)胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層。
4.用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色單個(gè)核細(xì)胞層到另一15ml離心管中,向所得離心管
中加入10ml清洗液(產(chǎn)品編號(hào):2010X1118),混勻細(xì)胞。
5. 250g,離心10min。
6.棄上清。
7.用吸管以5ml清洗液(產(chǎn)品編號(hào):2010X1118)重懸所得細(xì)胞。
8. 250g,離心10min。
9.重復(fù)67、8,棄上清后以0.5ml后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。
情況B:血液樣本量為3-6ml時(shí),實(shí)驗(yàn)方法如下:
1.取一支15ml離心管,先加入與血液樣本等量的分離液。
2.用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上,400-650g,離心20-30min(注:根據(jù)血
液樣本量確定離心條件,血液樣本量越多,離心力越大,離心時(shí)間越長(zhǎng),具體離心條件
需客戶(hù)自行摸索,以達(dá)到分離效果,但zui大離心力不超過(guò)1000g)。
3.離心后,此時(shí)離心管中由上至下分為四層。*層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色單個(gè)
核細(xì)胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層。
4.用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色單個(gè)核細(xì)胞層到另一15ml離心管中,向所得離心管
中加入10ml清洗液(產(chǎn)品編號(hào):2010X1118),混勻細(xì)胞。
5. 250g,離心10min。
6.棄上清。
7.用吸管以5ml清洗液(產(chǎn)品編號(hào):2010X1118)重懸所得細(xì)胞。
8. 250g,離心10min。
9.重復(fù)67、8,棄上清后以0.5ml后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。
二、使用50ml離心管時(shí):
情況A:血液樣本量為6-10ml時(shí),實(shí)驗(yàn)方法如下:
1.取一支50ml離心管,先加入與血液樣本等量的分離液。
2.用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上,500-950g,離心20-30min(注:根據(jù)血
液樣本量確定離心條件,血液樣本量越多,離心力越大,離心時(shí)間越長(zhǎng),具體離心條件
需客戶(hù)自行摸索,以達(dá)到分離效果,但zui大離心力不超過(guò)1200g)。
3.離心后,此時(shí)離心管中由上至下分為四層。*層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色單個(gè)
核細(xì)胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層。
4.用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色單個(gè)核細(xì)胞層到另一15ml離心管中,向所得離心管
中加入10ml清洗液(產(chǎn)品編號(hào):2010X1118),混勻細(xì)胞。
5. 250g,離心10min。
6.棄上清。
7.用吸管以5ml清洗液(產(chǎn)品編號(hào):2010X1118)重懸所得細(xì)胞。
  8. 250g,離心10min。
9.重復(fù)6、7、8,棄上清后以0.5ml后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。
情況B:血液樣本量為10-20ml時(shí),實(shí)驗(yàn)方法如下:
1.取一支50ml離心管,先加入與血液樣本等量的分離液。
2.用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上,650-110g,離心20-30min(注:根據(jù)血
液樣本量確定離心條件,血液樣本量越多,離心力越大,離心時(shí)間越長(zhǎng),具體離心條件
需客戶(hù)自行摸索,以達(dá)到分離效果,但zui大離心力不超過(guò)1200g)。
3.離心后,此時(shí)離心管中由上至下分為四層。*層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色單個(gè)
核細(xì)胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層。
4.用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色單個(gè)核細(xì)胞層到另一15ml離心管中,向所得離心管
中加入10ml清洗液(產(chǎn)品編號(hào):2010X1118),混勻細(xì)胞。
5. 250g,離心10min。
6.棄上清。
7.用吸管以5ml清洗液(產(chǎn)品編號(hào):2010X1118)重懸所得細(xì)胞。
8. 250g,離心10min
9.重復(fù)6、78,棄上清后以0.5ml后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。
【注意事項(xiàng)】
1.全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在20±2的條件下進(jìn)行。為獲得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,
在取血2h內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),血液存放時(shí)間越長(zhǎng),細(xì)胞分離效果越差。血液放置超過(guò)6h
后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。
2.本實(shí)驗(yàn)不要使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,應(yīng)使用無(wú)靜電、低靜電離
心管及未經(jīng)堿處理過(guò)后的玻璃制品,因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面
會(huì)變成毛面,影響細(xì)胞分離效果。
3.吸取過(guò)多的單個(gè)核細(xì)胞層及分離液層會(huì)導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的
粒細(xì)胞數(shù)量增加。
4.吸取過(guò)多的單個(gè)核細(xì)胞層上層溶液會(huì)導(dǎo)致血漿蛋白及血小板混雜。
5.如所實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過(guò)低,請(qǐng)上海研謹(jǐn)以尋求幫助,具體
詳見(jiàn)下方生產(chǎn)企業(yè)信息。
6.當(dāng)血液樣本粘度過(guò)高需稀釋時(shí),*稀釋方法:將血液與樣本稀釋液(產(chǎn)品編號(hào):
2010C11191:1稀釋混勻備用。注:不當(dāng)?shù)南♂尫椒〞?huì)降低細(xì)胞得率及活性。如血液樣
  本經(jīng)過(guò)稀釋則分離過(guò)程中需適當(dāng)降低離心力和離心時(shí)間。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
18-25保存,有效期2年。本品易感染細(xì)菌,需無(wú)菌條件操作。無(wú)菌條件下操作,啟
封后置常溫保存。如4保存,本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。
【參考值(參考范圍)】
本實(shí)驗(yàn)淋巴細(xì)胞提取率及純度均大于80%
下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例,用戶(hù)可適當(dāng)進(jìn)行參考。

 
【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】
1.所獲得淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。
2.所獲得淋巴細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。
3.所獲得淋巴細(xì)胞的鑒定方法
A.流式細(xì)胞技術(shù)
B.免疫組化技術(shù)
C.原位雜交技術(shù)
D.PCR技術(shù)
注:上述技術(shù)方案詳情請(qǐng)登陸上海研謹(jǐn)生物公司搜索細(xì)胞分離、
純化、擴(kuò)增、鑒定及生物治療技術(shù)手冊(cè),并在說(shuō)明書(shū)項(xiàng)目欄下下載使用。
【可能存在的問(wèn)題及解決方法】
1.由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問(wèn)題及解決方案如下表所示:

出現(xiàn)情況

出現(xiàn)原因

建議解決方案

離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層

轉(zhuǎn)速過(guò)小或離心時(shí)間過(guò)短

適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速

離心后目的細(xì)胞存在于分離液中

轉(zhuǎn)速過(guò)大或離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng)

適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速

離心后白環(huán)層彌散

細(xì)胞密度過(guò)大

調(diào)整細(xì)胞密度

離心后白環(huán)層太淺或看不

細(xì)胞密度過(guò)小

調(diào)整細(xì)胞密度

2.本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心,其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地
區(qū)客戶(hù)可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對(duì)離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí),恒定離
心時(shí)間,對(duì)離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。
3.本分離液依照標(biāo)準(zhǔn),全部使用藥用級(jí)原料,性能指標(biāo)與國(guó)產(chǎn)同類(lèi)產(chǎn)品略有不同,可
能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不*的情況,可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。
注:在對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí),離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g為基數(shù),直至達(dá)到分離效果,
離心力zui小不得小于 400g,zui大不得大于 1200g。離心時(shí)間以 20-30min為準(zhǔn)。

 

滬公網(wǎng)安備 31011802001676號(hào)

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