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阿奇霉素快速檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

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詳細(xì)介紹

阿奇霉素

快速檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

一、原理

本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物阿奇霉素將和微孔條上預(yù)包被的

偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗阿奇霉素抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物阿奇霉素的含量成

負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物阿奇霉素的含量。

二、試劑盒特性

產(chǎn)品貨號(hào):       YJ63A\J1

靈 敏 度:       0.05ppb

孵育溫度:       25℃

孵育時(shí)間:       30min~15min

樣本檢測(cè)下限

組   織     ······································· 0.5ppb

雞   蛋     ······································· 0.5ppb

牛   奶     ······································· 0.5ppb


交叉反應(yīng)率

阿奇霉素(Azithromycin) ···················· 100%

紅霉素(Erythromycin) ···················· <1%

泰勒菌素(Tylosin) ···························· 30%

替米考星(Tilmicosin) ························ 23%


樣本回收率

組   織  ·································  70%~120%

三、試劑盒組成

1

微量測(cè)試孔

每條8孔,一板12條

2

標(biāo)準(zhǔn)液×6瓶

(1ml/瓶)

0ppb

0.05ppb

0.15ppb

0.45ppb

1.35ppb

4.05ppb

3

高濃度標(biāo)準(zhǔn)品

1ml

100ppb

4

酶標(biāo)記物

7ml

紅色帽

5

抗體工作液

7ml

藍(lán)色帽

6

底物A液

7ml

白色帽

7

底物B液

7ml

黑色帽

8

終止液

7ml

黃色帽

9

20X濃縮洗滌液

15ml

白色帽

10

20X提取液A

15ml

黃色帽

11

2X提取液B

50ml*2

透明帽


四、所用儀器、試劑

具備的儀器:

酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)、恒溫箱、打印機(jī)

微量移液器:?jiǎn)蔚?20~200µl、單道100~1000µl、多道30~300 µl

試      劑:氫氧化鈉、甲醇

五、樣本前處理步驟

樣本處理前須知

(a)實(shí)驗(yàn)中必須使用

一次性吸頭,吸取不同試劑時(shí)要更換吸頭

(b)實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈,必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

樣本前處理需配制:

配液1  提取液A

       1份20X提取液A+ 19份去離子水混合。

配液2  提取液B

       1份2X提取液B+ 1份去離子水混合。

配液3  1M  NaOH溶液

       稱(chēng)取4g氫氧化鈉固體加去離子水定容至100ML。

配液4  10%甲醇

       1份無(wú)水甲醇+ 9份去離子水混合


樣本處理:

(a)組織樣本的處理方法

1、 稱(chēng)2±0.05g均質(zhì)后的組織至50ml離心管中,加入3ml提取液A,渦旋振蕩3min;

2、再加入600µl 1M  NaOH溶液和2.4ml 提取液B,渦旋振蕩3min;室溫4000r/min以上離心5min;

3、取50 µl上層液體用于分析。(注:離心后若有脂肪層,去除脂肪層或撥開(kāi)脂肪層,取清澈液體進(jìn)行分析)。

樣本稀釋倍數(shù):  4倍

此方法為多合一(組合Ⅱ)處理方法,樣本可合一處理。

(b)組織(雞肉、鴨肉)、雞蛋、牛奶樣本處理方法

1、 稱(chēng)取均質(zhì)后的新鮮樣本1±0.05g于50ml離心管中,加入5ml 10%甲醇,振蕩3min,室溫4000r/min以上離心5min;

2、 取50 µl上清用于分析。

樣本稀釋倍數(shù):  5倍


六、 酶標(biāo)免疫分析程序:

測(cè)定前應(yīng)須知:

1、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫(20-25℃)。

2、 使用之后立即將所有試劑放回2~8℃。

3、 在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA測(cè)定程序中的要點(diǎn)。

4、 所有恒溫孵育過(guò)程,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。

操作步驟:

1、 從2~8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫(20-25℃)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

2、 取出框架及需要數(shù)量的微孔,將不用的微孔放入自封袋,保存于2~8℃。

3、 配液:洗滌液配制

將15ml濃縮洗滌液(20倍濃縮)用去離子水

按照1:19稀釋?zhuān)?份濃縮洗滌液+19份去離子

水),或按所需用量配制洗滌液。

4、 編號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

5、 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加酶標(biāo)記物50µl/孔,再加入50µl/孔的抗體工作液,用蓋板膜蓋板,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境反應(yīng)30min


6、 將孔內(nèi)液體甩干,用洗滌液250µl/孔洗板4~5次,每次間隔15-~30秒,用吸水紙拍干(拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。

7、 顯色:加入底物A液50µl/孔,再加入底物B液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境中避光顯色15min。

8、 測(cè)定:加入終止液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處(建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè),5min內(nèi)讀數(shù)),測(cè)定每孔OD值。

七、結(jié)果判定

結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含阿奇霉素量成負(fù)相關(guān)。

1、粗略判定:

用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3,樣本2的吸光度值為1.0,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:0ppb為2.243; 0.05ppb為1.816;0.15ppb為1.415;0.45ppb為0.74;1.35ppb為0.313;4.05ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是1.35ppb~4.05ppb;樣本2的濃度范圍是0.15ppb~0.45ppb,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中阿奇霉素實(shí)際濃度。

2、定量分析

(1)百分吸光率的計(jì)算,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘以100%,即

百分吸光率(%)=B×100%

B0

B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以阿奇霉素標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/ml)的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中阿奇霉素實(shí)際濃度。

若利用試劑盒專(zhuān)業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(歡迎來(lái)電索?。?/p>

八、 注意事項(xiàng)

1、 室溫低于25℃或試劑及標(biāo)本未回到室溫(20~25℃)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。

2、 在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì)伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

3、 混合要均勻,否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。

4、 反應(yīng)終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。

5、 不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會(huì)引起靈敏度、OD值變化;不要交換使用不同批號(hào)的盒中試劑。

6、 不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封;標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對(duì)光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。

7、 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。標(biāo)準(zhǔn)品1的吸光度值小于0.5時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。

8、 該試劑盒最佳反應(yīng)溫度為25℃,溫度過(guò)高或過(guò)低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

九、儲(chǔ)藏條件和保質(zhì)期

1、 儲(chǔ)藏條件:試劑盒于2~8℃保存,不要冷凍。

2、 保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見(jiàn)包裝盒。

提示:酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,酶標(biāo)板仍然正常有效,不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,請(qǐng)放心使用。

實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù):






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