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NF-KB p65活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
NF-KB p65活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
更新時(shí)間:2025-02-05
訪問量: 2923
廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家

提供商:上海研謹(jǐn)生物/杭州研謹(jǐn)生物
服務(wù)名稱:NF-KB p65活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
規(guī)格:實(shí)驗(yàn)服務(wù)
價(jià)格: 200元
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NF-KB p65活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品概述:

NF-KB p65活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)



核轉(zhuǎn)錄因子NF-kappaB (NF-kB) 是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子,參與調(diào)控多種與炎癥、抗凋亡、

腫瘤形成和轉(zhuǎn)化有關(guān)的基因表達(dá)。NF- kappaB (NF _kB)初被鑒定為在B細(xì)胞中和免疫球蛋白k輕鏈的增強(qiáng)子結(jié)合。但隨后在非B-細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中被發(fā)現(xiàn),形成NF-KB和kB的復(fù)合物。初在DNA結(jié)合蛋白復(fù)臺(tái)物中分離的NF -kB是由p65(ReIA)和p50構(gòu)成的異源雙聚體。其他分離的單體包括p49 (也可稱為p52) , p75 (C-Rel) ,p68(ReIB)。 p65,p68,p75單體起反式激活作用。p50, p49 (p52) 單體具有DNA結(jié)合活力,但只具有微量的反式激活作用。據(jù)報(bào)道p49和NF-kB的單體p65形成具有轉(zhuǎn)錄活力的異源雙體,類似于p50/ p65異源雙體。p49/ p65和p50/ p65異源雙體在細(xì)胞質(zhì)中受一種叫kBa/MAD-3的抑制劑調(diào)節(jié)。


IkB和p65單體結(jié)合,阻制了細(xì)胞核中的定位和DNA的結(jié)合。在體外高濃度的p65能形成同源雙聚體,能和DNA微弱地結(jié)合。Poly(dl:dC)能抑制這一 反應(yīng) 。p49和p50也能形 成同源雙聚體,但在細(xì)胞中的濃度很低。通常,在作NF-KB的凝膠遷移實(shí)驗(yàn)時(shí),在20ul的反應(yīng)體積中,有溶于10 mM HEPES的0.28pmoles的NF -kB9寡核苷酸(pH7.9), 50mMKCI, 0.2mMEDTA, 2.5mM DTT, 10%甘油,0.05%NP-40。當(dāng)用純化的蛋白時(shí),250-300ng足以形成凝膠遷移復(fù)合物, 而需用10ug的Hel a細(xì)胞核抽提物。凝膠遷移復(fù)合物在室溫中保溫30分鐘,在50mMTris(pH8 3)和38mM甘氨酸的7%聚丙烯酰胺凝膠電泳中分離凝膠遷移復(fù)合物。含考馬斯蘭和二甲苯藍(lán)色素的加樣溶液只能加入到陰性對(duì)照反應(yīng)中,因這兩種色素會(huì)加劇NF-kB復(fù)合物的解離。當(dāng)用Hel a細(xì)胞核抽提物作為結(jié)合蛋白來源時(shí),可形成兩種序列特異的凝膠遷移復(fù)合物,即p50/p50同源雙聚體和p50/ p65異源雙聚體。在表達(dá)p49,p50, p65的細(xì)胞中, 可檢測(cè)到4個(gè)序例特異的凝膠遷移復(fù)合物(p49/ p49,p50/ p50,p50/ p65,p49/ p65),如果存在高濃度的p65,可檢測(cè)到微量的p65/p65.


下列試劑可加強(qiáng)NF- kB在體外的結(jié)合: mM的GTP, ATP, 精胺,亞精胺,鋇或鈣離子,ng的

Co+3(NH3)6 (12) 。提取組織或細(xì)胞核蛋白,利用不同形式的NF -Kb p65抗體捕獲細(xì)胞核蛋白并加以區(qū)分,通過酶標(biāo)儀450nm處測(cè)定核蛋白標(biāo)準(zhǔn)品與NF -Kb p65吸光度值,進(jìn)行定量比較,從而明確目的蛋白的活化度。

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