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孔雀石綠快速檢測(cè)試劑盒
孔雀石綠快速檢測(cè)試劑盒
更新時(shí)間:2025-02-06
訪問(wèn)量: 3667
廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家

孔雀石綠檢測(cè)試劑盒*中垂詢! 孔雀石綠快速檢測(cè)試劑盒用于檢測(cè)相應(yīng)殘留物孔雀石綠的含量。

孔雀石綠快速檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品概述:

 

一、孔雀石綠快速檢測(cè)試劑盒原理

本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng) ELISA 方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物孔雀石綠將和 微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗孔雀石綠抗體, 加入酶標(biāo)記物后,用 TMB 底物顯色,樣本吸光值 與其所含殘留物孔雀石綠的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn) 曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物孔雀石綠的含量。

二、孔雀石綠快速檢測(cè)試劑盒特性

試劑盒靈敏度:  0.05ppb

孵育溫度:    25℃

孵育時(shí)間:    30min~30min~15min

樣本檢測(cè)限

 

水樣 ———————— 0.1ppb

 

水產(chǎn)品 ·——————+—— 0.5ppb

 

  • 交叉反應(yīng)率

 

隱性孔雀綠 ————————

0.1%

結(jié) 晶 紫

—————————

95%

隱性結(jié)晶紫

—————————

0.1%

 

  • 樣本回收率

 

水樣、水產(chǎn)品 ————————  80%~110%

 

  • 精密度

板內(nèi)、板間變異系數(shù)≤12%

 

三、試劑盒組成

1

微量測(cè)試孔

每條 8 孔,一板 12 條

 

 

 

 

 

10 倍濃縮標(biāo)準(zhǔn)液

0ppb

0.5ppb

 

×6 瓶

 

 

2

1.5ppb

4.5ppb

 

 

 

 

 

(1ml/瓶、黑色帽) 13.5ppb

40.5ppb

3

酶標(biāo)記物

12ml

紅色帽

 

 

 

 

4

抗體工作液

7ml

藍(lán)色帽

 

 

 

 

 

5

底物 A 液

7ml

白色帽

 

 

 

 

6

底物 B 液

7ml

黑色帽

 

 

 

 

7

終止液

7ml

黃色帽

 

 

 

 

8

20X 濃縮洗滌液

40ml

白色帽

 

 

 

 

9

氧化劑

3ml

黑色帽

 

 

 

 

10

4X 濃縮復(fù)溶液

50ml

透明帽

 

 

 

 

 

四、所用儀器、試劑

具備的儀器:酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、 刻度移液管、天平(感量 0.01g)、氮 吹儀、恒溫箱微量移液器:?jiǎn)蔚?nbsp;20~200µl、單道 100~1000µl、多道 30~300 µl

試 劑:乙腈、二氯甲烷、無(wú)水硫酸鈉、正己烷

五、樣本前處理步驟

樣本處理前須知

(a)實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭,吸取不同試 劑時(shí)要更換吸頭。

(b)實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈, 必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔,以避免污染干擾實(shí) 驗(yàn)結(jié)果。

 樣本前處理需配制: 配液 1 樣品提取液乙腈-二氯甲烷混合溶液:

V 乙腈-V 二氯甲烷 = 4 : 1,取 40ml 乙腈, 再加入 10ml 二氯甲烷,混勻后使用。

配液 2 樣品復(fù)溶液

將 4X 濃縮復(fù)溶液用去離子水按 1:3 稀釋 (1 份 4×濃縮復(fù)溶液+3 份去離子水),或按所需用 量配制。

 樣本處理:

(a)水樣處理方法

取 50µl 清澈水樣樣直接測(cè)定(如果水樣渾濁 一定要過(guò)濾或 4000r/min 離心 10min,直至得到 清澈樣),暫不使用的樣本應(yīng)冷凍保存。

樣本稀釋倍數(shù):  1 倍

(b)水產(chǎn)品處理方法

1、稱取 2±0.05g 均質(zhì)組織樣品于 50ml 離心管中, 加入 6ml 樣品提取液(配液 1),2g 無(wú)水硫酸 鈉,振蕩 5min ,室溫(25℃左右)4000r/min以上離心 10min;

2、取 3ml 上清液,加入 20µl 氧化劑,搖勻,在 56℃ 條件下氮?dú)饣蚩諝饬鞔抵?干燥;

3、加入 1ml 正己烷,加入 1ml 樣品復(fù)溶液(配液2),振蕩搖勻 1min,4000r/min 以上離心 5min;

 

4、取下層 50 µl 用于分析;

樣本稀釋倍數(shù):  1 倍

注:此方法所得到的結(jié)果為孔雀石綠;隱性孔 雀石綠;結(jié)晶紫;隱性結(jié)晶紫的總量。

六、酶標(biāo)免疫分析程序:

測(cè)定前應(yīng)須知:

1、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫 (20~25℃)。

2、 使用之后立即將所有試劑放回 2~8℃。

3、 在 ELISA 分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于 洗板的*性,正確的洗板操作是 ELISA 測(cè)定 程序中的要點(diǎn)。

4、 所有恒溫孵育過(guò)程,避免光線照射,用蓋板膜 蓋住微孔板。

操作步驟:

1、從 2~8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫(20~ 25℃)平衡 30min 以上,注意每種液體試劑使 用前均須搖勻。

2、取出框架及需要數(shù)量的微孔,將不用的微孔放 入自封袋,保存于 2-8℃。

3、配液 1:將 40ml 濃縮洗滌液(20 倍濃縮)用去 離子水按照 1:19 稀釋(1 份濃縮洗滌液+19 份 去離子水),或按所需用量配制洗滌液。

配液 2:

配制孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)液:取一定量的 10 倍濃縮

標(biāo)準(zhǔn)液用樣品復(fù)溶液 10 倍稀釋,現(xiàn)配現(xiàn)用, 具體如下:

標(biāo)準(zhǔn)液6:配制4.05ppb 標(biāo)準(zhǔn)液--取50ul 40.5ppb標(biāo)準(zhǔn)液加 450ul 樣品復(fù)溶液混勻;

標(biāo)準(zhǔn)液5:配制1.35ppb 標(biāo)準(zhǔn)液--取50ul 13.5ppb標(biāo)準(zhǔn)液加 450ul 樣品復(fù)溶液混勻;

標(biāo)準(zhǔn)液 4:配制 0.45ppb 標(biāo)準(zhǔn)液--取 50ul 4.5ppb標(biāo)準(zhǔn)液加 450ul 樣品復(fù)溶液混勻;

標(biāo)準(zhǔn)液 3:配制 0.15ppb 標(biāo)準(zhǔn)液--取 50ul 1.5ppb標(biāo)準(zhǔn)液加 450ul 樣品復(fù)溶液混勻;

標(biāo)準(zhǔn)液 2:配制 0.05ppb 標(biāo)準(zhǔn)液--取 50ul 0.5ppb標(biāo)準(zhǔn)液加 450ul 樣品復(fù)溶液混勻;

標(biāo)準(zhǔn)液 1:配制 0ppb 標(biāo)準(zhǔn)液--取 50ul 0ppb 標(biāo)準(zhǔn)液加 450ul 樣品復(fù)溶液混勻;

4、編號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每 個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做 2 孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和 樣本孔所在的位置。

5、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本 50µl/孔到各自的微孔中,然后加 入抗體工作液 50µl/孔,用蓋板膜封板,輕輕振 蕩混勻。25℃環(huán)境中反應(yīng) 30min。

6、將孔內(nèi)液體甩干,用已稀釋的洗滌液 250µl/孔 洗板 4~5 次,每次間隔 15~30 秒,用吸水紙 拍干(拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺 破)。

7、每孔加入酶標(biāo)記物 100µl,蓋板膜蓋板后置25℃ 環(huán)境中反應(yīng) 30min。將孔內(nèi)液體甩干,用洗滌 液充分洗,4~5 遍(同上),用吸水紙拍干(拍 干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。

8、顯色:加入底物 A 液 50µl/孔,再加入底物 B 液 50µl/孔,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境中避光顯 色 15min。

9、測(cè)定:加入終止液 50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè) 定酶標(biāo)儀于 450nm 處(建議用雙波長(zhǎng) 450/630n m 檢測(cè),5min 內(nèi)讀數(shù)),測(cè)定每孔 OD 值。

七、結(jié)果判定

結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第 1 種方 法,定量判定用第 2 種方法。注意樣本吸光度值與 其所含孔雀石綠量成負(fù)相關(guān)。

1、粗略判定:

用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出 其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本 1 的吸光度值為 0.3, 樣本 2 的吸光度值為 1.0,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:

0ppb 為 2.243;0.05ppb 為 1.816;0.15ppb 為 1.415; 變質(zhì)。

0.45ppb 為 0.74;1.35ppb 為 0.313;4.05ppb 為 0.155。  8、該試劑盒佳反應(yīng)溫度為 25℃,溫度過(guò)高或過(guò)則樣本 1 的濃度范圍是 1.35ppb~4.05ppb;樣本 2的濃度范圍是 0.15ppb~0.45ppb,乘以其對(duì)應(yīng)的稀 釋倍數(shù)即為樣本中孔雀石綠實(shí)際濃度。

2、定量分析

(1)百分吸光率的計(jì)算,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分 吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值(雙 孔)除以*個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0 標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘 以 100%,即

B

百分吸光率(%)= ×100% B0

低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

九、儲(chǔ)藏條件和保質(zhì)期

1、儲(chǔ)藏條件:試劑盒于 2-8℃保存,不要冷凍。 2、保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為 1 年,生產(chǎn)日期見(jiàn)

包裝盒。

提示:酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,酶標(biāo)板仍然正 常有效,不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,請(qǐng)放心使用。

B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值 B0—0ng/ml 標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算 以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/ml)的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲 線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo) 準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀 釋倍數(shù)即為樣本中孔雀石綠實(shí)際濃度。

若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于 大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。

八、 注意事項(xiàng)

1、室溫低于 25℃或試劑及標(biāo)本未回到室溫(20~25℃)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的 OD 值偏低。

2、在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì) 伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。 所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

3、混合要均勻,否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。

4、反應(yīng)終止液為 2M 硫酸,避免接觸皮膚。

5、不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜 使用會(huì)引起靈敏度、OD 值變化;不要交換使用 不同批號(hào)的盒中試劑。

6、不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封;標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 和無(wú)色的發(fā)色劑對(duì)光敏感,因此要避免直接暴 露在光線下。

7、顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。標(biāo) 準(zhǔn)品 1 的吸光度值小于 0.5 時(shí),表示試劑可能

 

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